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常用的原性檢測方法

1、ELISA-橋法

對抗體藥物進行原性檢測是生物技術藥物申請臨床試驗和注冊的重要內容，盡管已有的動物試驗顯示原性不一定會在人體內產生預期的反應，但對藥物反應的評價仍顯得十分重要。 將抗原或抗體固定的過程稱為包被，換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。ELISA-橋法包被藥物，用標記的藥物檢測。此法的優點是能檢測各類抗體亞型，無種屬特異性，可高通量檢測，缺點是不易檢測到低親和力的抗體，包被或標記時可能會掩蓋或改變藥物的抗原表位，易受藥物本身的干擾。

2、ELISA-直接法

抗體的包被一般均采用直接吸附法，蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。 ELISA-直接法包被藥物，用標記抗體檢測。ELISA-直接法用于原性檢測的優點是可能會增加檢測低親和力抗體的能力，且高通量。然而當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法。而且直接包被時可能會掩蓋或改變藥物的表位，僅檢測單一亞型，有種屬特異性，多次洗滌時丟失低親和力抗體，參考品與樣本之間試劑可能不同。

3、ELISA-間接法

ELISA-間接法包被單抗或生物素，再加藥物，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。

4、放射分析法（RIA）

RIA 是一種微量分析法，就是利用放射性核素標記抗原或抗體，然后與被測的抗體或抗原結合，形成抗原抗體復合物的原理來進行分析的。 它兼有放射性同位素的靈敏性和抗原、抗體反應的特異性兩大特點。該法還具有準確性高和精密度好，便于標準化以及操作簡便、經濟等優點。由于RIA具有靈敏度高、特異性強、測量簡單和成本低等優點，RIA在應用方面具有一定的生命力。但是，又因為它較致命的弱點就是使用放射性核素，此外標記物有效使用時間短，難以實現操作和測量的自動化等，它的進一步發展受到一些局限。現在分析技術都在朝著非同位素標記分析的方向發展。

5、電化學發光法（ECL）

電化學發光法（ECL）源于電化學法和化學發光法，不僅可以應用于所有的測定，而且還可用于DNA／RNA探針檢測。它的優點是液相法，可檢測各種抗體亞型，無種屬特異性、高通量，可使用高濃度基質，檢測表面積大和信號穩定。缺點是需制備2種標記物（生物素和TAG），標記物分子的表位可能會變化或標記過程會改變分子，所用試劑通用性差。

6、表面等離子體共振

表面等離子體共振法的優點是液相法，不需結合物（酶標記抗體），能檢測到不同親和力的抗體和各亞型抗體，無種屬特異性。缺點是化學連接可能會影響分子，與葡聚糖連接影響表位的暴露，復性可能會使分子降解，所用試劑通用性差，低通量，如果產生的抗體是藥物同種亞型的抗體，要證實一種人源化抗體的抗抗體反應比較困難，靈敏度低。

7、酶聯斑點法（ELISpot）

酶聯斑點法（ELISpot）的原理與ELISA類似，也是檢測細胞產生的細胞因子或其他可溶性蛋白的方法，它不僅能測定細胞因子量，還可通過計數檢測分泌此細胞因子的細胞頻率，靈敏度**ELISA，而且實驗采用的捕獲抗體不會影響活化細胞分泌細胞因子。缺點是比ELISA技術復雜而費時，需嚴密控制實驗條件，操作人員需技術熟練，并能對實驗結果進行分析，以減少實驗偏差；屬半定量方法。

8、PCR法（IPCR）

PCR法（IPCR）是在ELISA的基礎上建立起來的，用PCR擴增代替ELISA的酶催化底物顯色。PCR具有很強的放大能力，可以定量地檢測DNA和RNA，具有非常高的靈敏度和特異性，因此，將與抗原結合的特異抗體通過連接分子與DNA結合，再經PCR擴增定量檢測抗原使得IPCR的靈敏性**ELISA。 與對應的ELISA比較，IPCR至少可使抗體檢測的靈敏度提高1000倍，而且該法中僅僅采用稀釋的方法就可以消除生物樣品中基質的干擾。

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