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Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
華微檢測提供專業(yè)WesternBlotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),通過SDS-PAGE電泳,電轉(zhuǎn)移,免疫檢測等標(biāo)準(zhǔn)化流程,實(shí)現(xiàn)高靈敏度,高特異性蛋白表達(dá)分析,適用于動物組織/植物/微生物等樣品,可用于基因功能研究,疾病標(biāo)志物檢測(自身免疫病/腫瘤),嚴(yán)格把控樣品質(zhì)量與抗體選擇,確保結(jié)果可靠。

Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)


        Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)是一種基于抗體與特定蛋白結(jié)合的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測和分析蛋白質(zhì)表達(dá)。Western Blotting實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)是生命科學(xué)研究中不可或缺的工具之一,其通過特定的抗體來檢測和分析目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況,具有高靈敏度和特異性。在進(jìn)行Western Blotting實(shí)驗(yàn)時,需特別注意樣品的制備、抗體的選擇及實(shí)驗(yàn)對照的設(shè)置。


一、基本原理

SDS-PAGE電泳:首先通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離樣品中的蛋白質(zhì),SDS會與蛋白質(zhì)結(jié)合并使其帶負(fù)電,導(dǎo)致其在電場中向正極移動,從而根據(jù)分子量大小分離不同蛋白質(zhì)。

電轉(zhuǎn)移:分離后的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)移到固相載體(通常是硝酸纖維素膜或PVDF膜)上,這個過程稱為"印跡"。

免疫檢測:使用特異性一抗與目標(biāo)蛋白結(jié)合,然后加入酶標(biāo)記或熒光標(biāo)記的二抗,通過化學(xué)發(fā)光或熒光方法使目標(biāo)蛋白在X光膠片或數(shù)字成像系統(tǒng)中可見。


二、實(shí)驗(yàn)步驟

樣品準(zhǔn)備:收集并處理細(xì)胞或組織樣品,提取總蛋白并進(jìn)行定量。

電泳與轉(zhuǎn)印:通過SDS-PAGE電泳分離蛋白,然后將蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上。

雜交與顯色:使用特異性一抗和二抗進(jìn)行免疫反應(yīng),并通過ECL、熒光或其他底物進(jìn)行顯色。

數(shù)據(jù)分析:根據(jù)條帶的位置和強(qiáng)度定性或定量分析蛋白表達(dá)水平。


三、應(yīng)用范圍

蛋白表達(dá)分析:用于檢測特定基因調(diào)節(jié)、基因功能研究以及驗(yàn)證其他蛋白分析技術(shù)如蛋白芯片、蛋白質(zhì)譜的結(jié)果。

疾病診斷與研究:應(yīng)用于疾病標(biāo)志物的檢測和發(fā)病機(jī)制的研究,尤其在自身免疫病和腫瘤研究中具有重要意義。


四、技術(shù)服務(wù)特點(diǎn)

高靈敏度和特異性:利用抗體高度特異性結(jié)合特性,能夠敏感地檢測低豐度蛋白。

廣泛的適用范圍:適用于多種生物樣品(如動物組織、植物、微生物等)和多種研究目的。

多樣化的顯色方法:包括放射自顯影、化學(xué)發(fā)光、熒光等多種顯色方法,滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求和條件。


五、技術(shù)服務(wù)注意事項(xiàng)

樣品質(zhì)量:確保樣品新鮮且正確保存,避免蛋白降解或修飾(如磷酸化蛋白去磷酸化)。

抗體選擇:提供質(zhì)量保證的一抗,并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定一抗稀釋度和二抗選擇。

實(shí)驗(yàn)對照:設(shè)置內(nèi)參蛋白以校正上樣誤差,并盡量提供陽性對照樣品以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系。




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